不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较

编号 zgly0001643561

文献类型 期刊论文

文献题名 不同载体表达的家蝇β-葡萄糖苷酶生物学活性比较

作者 张姝  胡蓉  黄健  吴建伟  国果  付萍  修江帆  尚小丽 

作者单位 贵州医科大学临床基础检验学教研室  贵州医科大学人体寄生虫学教研室 

母体文献 环境昆虫学报 

年卷期 2018年04期

年份 2018 

分类号 Q966 

关键词 家蝇  β-葡萄糖苷酶  异源性表达  酶活性 

文摘内容 克隆家蝇内源性β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BG)基因,建立两种原核表达体系和一种真核表达体系,分别检测表达产物的活性,比较不同表达体系对其表达水平及重组蛋白酶学性质的影响,为进一步研究和利用家蝇BG酶奠定基础。本研究根据BG酶基因的cDNA序列设计引物扩增BG酶基因成熟肽的基因片段,分别采用表达载体pET-28a(+)和pEGX-4T-1构建原核表达体系并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。在65 kDa附近均出现特异性蛋白条带,进行Western Blotting鉴定证实重组质粒在其宿主菌E.coli BL21(DE3)中成功表达,命名为MDBG-1蛋白和MDBG-2蛋白。同时选用真核表达载体pPICZa A构建酵母分泌型表达体系在酵母细胞GS115中获得稳定的表达,将其命名为MDBG-3蛋白。采用七叶苷平板法和DNS法对三种表达体系所重组表达的蛋白进行酶活性鉴定和检测,显示3种表达体系所表达的融合蛋白均具有BG酶活性,其酶活力有所不同,且真核表达体系所表达的蛋白酶活性最高。本研究对家蝇β-葡萄糖苷酶基因表达的重组蛋白特性进行初步研究,为发现新的有效纤维素酶体系提供基础数据。