银杏种胚蛋白提取及双向电泳体系的优化

编号 zgly0001527750

文献类型 期刊论文

文献题名 银杏种胚蛋白提取及双向电泳体系的优化

作者 李佳  陆秀君  梅梅  孙晓梅  张晓林 

作者单位 沈阳农业大学林学院  沈阳农业大学园艺学院 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2016年03期

年份 2016 

分类号 S792.95 

关键词 银杏  种胚  蛋白质  双向电泳 

文摘内容 [目的]探索一套适用于银杏种胚蛋白的双向电泳体系,为研究银杏种胚在不同发育阶段的表达差异蛋白提供基础。[方法]分别从蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Tris-HCl法、Trizol提取法和TCA-丙酮-酚法）、裂解液中的尿素浓度(6 mol·L-1、7 mol·L-1、8 mol·L-1、9 mol·L-1)蛋白上样量（1 500μg、1 650μg、1 800μg）和分离胶浓度（10%、12.5%、15%）四个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行分析,筛选出适宜双向电泳的条件。[结果]采用TCA-丙酮-酚法提取银杏种胚蛋白,在裂解液中尿素浓度为8 mol·L-1、上样量为1 650μg、分离胶浓度为12.5%的方法,可以获得分辨率较高、背景更加清晰、重复性更好的银杏种胚蛋白质双向电泳图谱。[结论]建立了适合银杏种胚蛋白双向电泳的体系:TCA-丙酮-酚法制备样品,选取尿素浓度为8 mol·L-1的裂解液提取样品粉末全蛋白,蛋白上样量控制为1 650μg,第二向分离胶浓度定为12.5%。