橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

编号 zgly0000539360

文献类型 期刊论文

文献题名 橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 段翠芳  曾日中  聂智毅  黎瑜  魏小弟 

作者单位 中国热带农业科学院橡胶研究所  农业部热带作物生物学重点开放实验室 

母体文献 热带作物学报 

年卷期 2007,28(3)

页码 46-51

年份 2007 

分类号 S794.104 

关键词 橡胶树  胶乳  cDNA  文库  EST 

文摘内容 为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电泳检测,双链cDNA的大小主要在1.0～2.0kb之间,收集大于500bp的cDNA片段,以DH10B为宿主菌,pBluescriptII为载体,构建未经扩增的橡胶树胶乳cDNA初级文库。该文库的库容大于5.0×105Pfu/mL,重组率大于90%。随机对文库的3200个克隆进行了EST测序,用所测序列与GenBank非冗余蛋白质数据库进行BlastX比对,并将比对上的基因进行生物学功能注释和分类。研究结果表明,所构建的胶乳cDNA初级文库质量较高,适合包括低丰度表达基因在内的橡胶树胶乳功能基因的筛选,是研究橡胶树胶乳中重要功能基因的最主要资源和开展橡胶树胶乳代谢与橡胶生物合成的分子机制研究的基础。