疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

编号 zgly0001372833

文献类型 期刊论文

文献题名 疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

作者 郑艳  周波  宋宁宁  李多川 

作者单位 山东农业大学微生物系 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 Q78 

关键词 内含子  成熟蛋白  诱导  分泌表达  重组酶  最适反应温度  最适反应pH  热稳定 

文摘内容 疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus可产生具有重要工业生产价值的脂肪酶。根据已报道的相应序列设计特异引物,综合运用PCR、RT-PCR技术克隆到脂肪酶基因的全长DNA和cDNA序列。其中DNA序列长1071bp,包含876bp的开放阅读框以及3段内含子;cDNA序列长885bp。结构基因编码蛋白包含292个氨基酸,前17个氨基酸构成信号肽。序列提交GenBank,登录号分别为EU022703和EU370914。将脂肪酶基因cDNA序列的开放阅读框克隆到酵母分泌型表达载体pPIC9K中,转化毕赤酵母GS115得到重组子且实现了分泌表达。将重组子诱导产酶,在培养温度30℃、甲醇添加量1%的情况下,小规模发酵量达0.93mg/mL,其分泌表达的最高酶活为7.2U/mL。重组酶最适反应温度和pH分别是60℃和8.0。表达蛋白在60℃保温1h后仍有完全酶活,具有较高的热稳定性。