硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立

编号 zgly0001351018

文献类型 期刊论文

文献题名 硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立

作者 曾斌  罗淑萍  李疆  程运江  廖康 

作者单位 新疆农业大学林学园艺学院  新疆农业大学农学院  华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 

母体文献 经济林研究 

年卷期 2009年01期

年份 2009 

分类号 S662.9 

关键词 新疆野扁桃  硅胶保存  基因组DNA  SSR反应体系 

文摘内容 对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究。结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA,较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响。通过A260/A280、琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30~50 ng DNA模板,0.5 U TaqDNA聚合酶,2.0 mmol.L-1MgCl2,0.2 mmol.L-1dNTPs,0.2 mmol.L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH8.0),反应终体积20μL,引物最佳退火温度为54~57℃。利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200~600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。