香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

编号 zgly0000646653

文献类型 期刊论文

文献题名 香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选

学科分类 220.45;经济林学

作者 叶生月  陈钢  张慧  刘建杰  曾燕如  吴慧敏 

作者单位 浙江林学院浙江省现代森林培育技术重点实验室  浙江省临安市林业局 

母体文献 浙江林学院学报 

年卷期 2010(1)

页码 87-92

年份 2010 

分类号 S664.5  S722.3 

关键词 经济林学  香榧  ISSR—PCR  引物筛选 

文摘内容 以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’基因组DNA为材料，对影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应（ISSR—PCR）的Taq酶用量、Mg^2＋浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs）浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR—PCR扩增体系为：总容积20μL，包括30ng模板DNA，16．67nkm Taq酶，0．350μmol·L^-1引物，1．625mmol·L^-1Mg^2＋，0．250mmol·L^-1dNTPs，10×PCR buffer 2μL。PCR扩程序：94℃变性5．0min；35个循环：94℃变性30S，退火45s，退火温度视引物而定，72℃延伸1．5min；最后72℃延伸7．0min，4℃保温。在此基础上，从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物．且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12