美洲黑杨木质素合成关键基因的克隆及反义表达载体的构建

编号 zgly0000718011

文献类型 期刊论文

文献题名 美洲黑杨木质素合成关键基因的克隆及反义表达载体的构建

学科分类 220.5540;木材学

作者 曹阳  袁澍  徐飞  张中伟  薛立薇  林宏辉 

作者单位 四川大学生命科学学院 

母体文献 中南林业科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2010,30(11)

页码 77-82

年份 2010 

分类号 S722.5 

关键词 生物科学与技术  美洲黑杨  木质素合成  关键基因  克隆技术  反义表达载体 

文摘内容 以美洲黑杨Populus deltoides新萌叶片为材料,通过自行设计引物,用RT—PCR的方法克隆了美洲黑杨木质素合成关键基因4CL和CAD基因部分序列。测序结果表明: 这两个基因片段长度分别为859 bp和493 bp。此外,人工合成了4CL基因木质部特异表达启动子4CLp,长度为1 180 bp。分别用限制性内切酶Hind III/BamH I、BamHI/Sma I和Sma I/Sac I对4CLp、4CL和CAD基因序列进行双酶切,同时用Hind III/Sac I对pBI121表达载体进行双酶切,回收了目的片段。酶切回收后用T4DNA连接酶克隆到植物表达载体pBI121中,并转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α。经质粒PCR和双酶切分析,确定获得了pBI—4CLp—a4CL—aCAD反义植物表达载体。