苹果潜隐性病毒一步三重检测体系的建立与优化

编号 zgly0001671645

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果潜隐性病毒一步三重检测体系的建立与优化

作者 王李芳  张越  刘聪  蔡洋洋  刘浪  孙建春  王雷存 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2019年07期

年份 2019 

分类号 S436.611.1 

关键词 苹果  潜隐性病毒  病毒检测  检测体系 

文摘内容 【目的】在两步单重检测体系基础上,建立能同时检测苹果茎痘病毒(ASPV)、苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的一步三重检测体系,以简化苹果潜隐性病毒检测方法。【方法】以携带ASPV、ASGV、ACLSV的苹果优系‘浓果-25’组培苗为试材,比较一步单重、一步两重和一步三重RT-PCR 3种检测体系的检测效果,对一步三重检测法中的退火温度、反转录时间、延伸时间、循环数和引物加量进行优化,并用带毒情况不同的苹果田间根茎叶、组培苗、脱毒苗对优化后的RT-PCR一步三重检测体系进行验证。【结果】一步单重RT-PCR体系一次只能检测1种病毒,一步两重RT-PCR体系一次能同时检测2种病毒,一步三重RT-PCR体系一次能同时检测3种病毒。优化后的一步三重RT-PCR检测体系为:50℃反转录20 min;94℃预变性20 min;94℃变性30 s,53～56℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环,引物加量为各病毒上、下游引物(10μmol/L)各1.0μL,无需进行终延伸。优化后的一步三重检测体系验证结果与两步单重检测结果一致,初步证明该检测体系合理。【结论】建立了苹果潜隐性病毒一步三重检测体系,该体系能同时对苹果样品中ASPV、ASGV和ACLSV 3种病毒进行检测。