桂花SRAP-PCR体系的确立及验证

编号 zgly0001579610

文献类型 期刊论文

文献题名 桂花SRAP-PCR体系的确立及验证

作者 李梅  侯喜林  郝日明 

作者单位 南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室  江苏省·中国科学院植物研究所(南京中山植物园)  南京农业大学园艺学院 

母体文献 植物资源与环境学报 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S685.13 

关键词 桂花  SRAP-PCR  扩增体系  优化  验证  遗传多样性 

文摘内容 以桂花〔Osmanthus fragrans(Thunb.)Lour.〕品种‘早银桂’的总DNA为模板,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA用量,Mg2+、dNTPs和引物浓度以及TaqDNA聚合酶用量进行单因子实验,确立了适合桂花总DNA的SRAP-PCR反应体系:反应体系总体积10μL,包括30 ng模板DNA、2.5 mmol.L-1Mg2+、0.20 mmol.L-1dNTPs、0.4μmol.L-1上下游引物和0.75 UTaqDNA聚合酶及1×PCR buffer。采用SRAP引物组合pm21-em8,以78个桂花品种的总DNA为样品,对优化的SRAP-PCR反应体系进行初步验证,共扩增出632条带,多态性条带百分率75.32%;扩增位点15个,多态性位点百分率为86.67%。运用优化的SRAP-PCR体系,使用筛选出的18对SRAP引物组合对88个桂花品种、1个桂花野生种以及2个外类群〔柊树O.heterophyllus(G.Don)P.S.Green和华东木犀O.cooperiHemsl.〕的总DNA进行扩增,共扩增出296个位点,其中多态性位点248个,多态性位点百分率为83.78%。实验结果显示,运用优化的SRAP-PCR反应体系获得的DNA条带清晰、扩增结果稳定、多态性较丰富;SRAP分子标记可用于桂花遗传多样性、品种资源鉴定、亲缘关系以及系统进化等方面的研究。