3种根萤叶甲实时荧光PCR检测技术研究

编号 zgly0001557432

文献类型 期刊论文

文献题名 3种根萤叶甲实时荧光PCR检测技术研究

作者 雍容婧  李志红  陈宏  王一椒  杨倩倩  胡俊韬  姜帆 

作者单位 中国农业大学  美国内布拉斯加林肯大学 

母体文献 植物检疫 

年卷期 2017年05期

年份 2017 

分类号 S41 

关键词 玉米根萤叶甲  十一星根萤叶甲  巴氏根萤叶甲  COI基因  TaqMan探针  实时荧光PCR  检测 

文摘内容 根萤叶甲属(Diabrotica)被我国列为进境植物检疫性有害生物,该属中的玉米根萤叶甲(D.virgifera virgifera)、十一星根萤叶甲(D.undecimpunctata)、巴氏根萤叶甲(D.barberi)是北美的主要农业害虫。为了建立一种快速的分子鉴定方法以鉴定这3种根萤叶甲,本研究从田间采集的成虫样品中获得其部分mtDNA COI序列,与Gen Bank中的相关序列进行比对,设计筛选出3种根萤叶甲的特异性引物和TaqMan探针,并进行实时荧光PCR特异性和灵敏度检测。特异性检测结果表明,用目标种根萤叶甲DNA和其特异性探针和引物进行实时荧光PCR反应时,在30个循环反应内(Ct值<30)有近S型扩增曲线出现,同时其他种均无荧光信号增长。此外,灵敏度结果显示,玉米根萤叶甲和巴氏根萤叶甲可检测的最小DNA模板浓度,即实时荧光PCR反应的灵敏度为0.1 ng/μL,十一星根萤叶甲为0.01 ng/μL。