矮牵牛PDS基因的克隆及其在shRNA介导的基因沉默中的应用

编号 zgly0001540194

文献类型 期刊论文

文献题名 矮牵牛PDS基因的克隆及其在shRNA介导的基因沉默中的应用

作者 杨莎  张彬  韩垚  杨霞  李名扬  郭余龙 

作者单位 西南大学园艺园林学院重庆市花卉工程技术中心南方山地园艺学教育部重点实验室 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2017年02期

年份 2017 

分类号 S681.9 

关键词 矮牵牛  八氢番茄红素脱氢酶基因  基因沉默  shRNA 

文摘内容 以矮牵牛(Petunia hybrida)自交系‘Mitchell Diploid’(MD)为材料,通过3′RACE和5′RACE获得了其八氢番茄红素脱氢酶基因(PhPDS)的cDNA序列,进而通过PCR扩增出编码区的基因组序列。分析结果显示,PhPDS的cDNA序列全长2 182 bp,编码区序列1 746 bp,编码582个氨基酸。推测的蛋白质序列具有类胡萝卜素脱氢酶的保守结构域特征。编码区的基因组序列长7 609 bp,结构与番茄和拟南芥等PDS基因相似,具有14个外显子和13个内含子。利用博德研究所的小发夹RNA(shRNA)设计程序设计了两个针对PhPDS的shRNA,构建植物表达载体转化矮牵牛后,从其中一个载体的转化子中获得白色愈伤组织和幼枝,对白色幼枝的RT-PCR检测表明,其PDS基因的cDNA累积量减少,表明shRNA基因沉默技术能在矮牵牛中应用。以PDS基因为靶基因比用花色素合成基因研究基因沉默技术能更快地分析基因沉默的效果,全长序列的获得将有助于PDS基因在矮牵牛基因沉默技术研究中的应用。