鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达

编号 zgly0001390555

文献类型 期刊论文

文献题名 鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达

作者 胡静平  董海辉  邱玉华  陈永井  王文兵  黄光镁  吴小锋  朱江 

作者单位 苏州大学基础医学与生物科学学院  苏州大学医学生物技术研究所  江苏大学生命科学研究院  浙江大学动物科学学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2010年02期

年份 2010 

分类号 S881.2 

关键词 B7-2蛋白  单链抗体  杂交病毒HyNPV  家蚕 

文摘内容 B7-2蛋白为免疫球蛋白超家族(IGSF)成员之一。采用PCR法从分泌鼠抗人B7-2抗体的杂交瘤细胞株克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3编码序列,体外构建抗人B7-2的鼠源单链抗体基因B7-2-ScFv。利用新型杂交病毒HyNPV的Bac-to-Bac表达系统,将B7-2-ScFv基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-B7-2-ScFv,转化大肠杆菌DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-B7-2-ScFv。将此重组杆粒的DNA转染Sf9细胞,获得重组病毒HyNPV-ScFv。感染该重组病毒的BmN细胞经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,至感染24h时目的蛋白已有表达,96h达到最高表达水平,表达产物的分子质量约31kD。用该重组病毒感染家蚕5龄起蚕,感染后96h蚕体表现出明显的发病症状。RT-PCR结果表明,5龄起蚕感染后48h,在脂肪体内已有目的基因转录,一直持续到感染后120h;SDS-PAGE和Western blotting分析表明,5龄起蚕感染96h后方可在脂肪体中检测到目的蛋白表达。构建并在家蚕中成功表达鼠抗人B7-2单链抗体,为深入研究和开发该抗体奠定了基础。