IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析

编号 zgly0001409678

文献类型 期刊论文

文献题名 IBV单链抗体的筛选及其互补决定区序列变异分析

作者 林源  赵蕾  王建敏  李本强  张英  王建华  朱建国 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  上海交通大学农业与生物学院上海市动物生物技术重点实验室  Raybiotech Inc.3607 Parkuay Lare  Suite 200  Norcross GA  USA30092 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年02期

年份 2011 

分类号 S852.65 

关键词 鸡传染性支气管炎病毒  单链抗体  筛选  抗原互补决定区  序列分析 

文摘内容 【目的】筛选能表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单链抗体(scFv)的原核阳性克隆,并分析scFv抗原结合位点的氨基酸变化。【方法】采用RT-PCR,从IBV疫苗免疫的鸡脾脏RNA中扩增出抗体编码基因的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。利用重组链延伸反应(SOE-PCR),将linker与VH和VL基因相连构建鸡scFv基因,并将其克隆到原核表达载体pOPE101-XP中,构建重组质粒并转入大肠杆菌表达,间接ELISA筛选原核表达的抗IBVscFv的阳性克隆,对其测序后进行Clustal.W多序列比较,分析scFv骨架区(FR)和互补决定区(CDR)氨基酸序列差异。【结果】筛选到表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80;将它们的氨基酸序列与鸡胚系Gemline进行多序列比较,结果显示,ZL.10、ZL.80在CDR中易变异氨基酸占各区氨基酸的比率均在40%以上,其中VH的CDR3达90%,VL的CDR3达60%。此外,ZL.10、ZL.80在VH的CDR3区分别增加5个和7个氨基酸。FR氨基酸变异率较少,且大多均在12%以下,而FR4未发生突变。【结论】通过体外筛选原核表达产物的方法,获得了表达IBVscFv的阳性克隆ZL.10和ZL.80,其VH、VL氨基酸序列中的变异主要发生在各自的CDR,二者VH的CDR3氨基酸序列差异很大,提示这2个scFv阳性克隆针对的是IBV不同的抗原位点。