Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建与分析

编号 zgly0001392960

文献类型 期刊论文

文献题名 Ⅰ型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建与分析

作者 云涛  倪征  刘光清  余斌  陈柳  华炯钢  李双茂  张彦明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年05期

年份 2010 

分类号 S858.32 

关键词 Ⅰ型鸭病毒性肝炎  全长cDNA克隆  感染性克隆 

文摘内容 【目的】建立Ⅰ型鸭病毒性肝炎(Duck hepatitis virus,DHV)的反向遗传系统。【方法】根据Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)ZJ-V/2006株全基因组序列设计并合成5对特异引物,进而应用RT-PCR技术分5段扩增了DHV全基因组cDNA。将扩增的cDNA重叠片段A、B、C和DE片段分别克隆到载体pBluescriptⅡKS(+)中,获得了DHV-ⅠZJ-V/2006株全长基因组cDNA克隆pBLDHV。在扩增5′末端时,引入ApaⅠ酶切位点和SP6启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入NruⅠ酶切位点,以供cDNA模板的线性化之用。【结果】核酸序列分析表明,DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长为7 711个核苷酸,与DHV-ⅠZJ-V BHK-21细胞分离株的同源性为99.9%;全长基因组中有6个核苷酸发生突变,均未导致对应的氨基酸发生改变,为沉默突变。【结论】成功构建了DHV-ⅠZJ-V/2006株基因组全长cDNA。