紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

编号 zgly0001433842

文献类型 期刊论文

文献题名 紫云英ISSR引物的筛选及PCR反应体系的优化

作者 孙清信  陈坚  张辉  祁建民  林忠平  胡鸢雷  林新坚 

作者单位 福建省农业科学院  福建农林大学生命科学院  北京大学生命科学院 

母体文献 植物遗传资源学报 

年卷期 2012年05期

年份 2012 

分类号 S551.9 

关键词 紫云英  退火温度  ISSR引物  正交试验  体系优化 

文摘内容 以紫云英为研究材料,用哥伦比亚大学(UBC)公布的100条ISSR引物和11种株系紫云英品种的DNA为模板进行PCR扩增,筛选出33条扩增条带较好的ISSR引物,对其中的ISSR引物进行梯度PCR,筛选出最佳的退火温度。再采用正交试验和单因素试验相结合的方法对紫云英ISSR-PCR反应体系的5种因素(模板、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP及引物)进行优化浓度。确立了适合紫云英的ISSR分析的反应体系。在25μl反应体系中,其反应浓度为:DNA模版50.00ng,Mg2+2.00mol/L,Taq聚合酶1.0 U,dNTP 0.25mmol/L,引物0.20μmol/L,2.5μl 10×buffer。本试验为以后利用ISSR技术进行紫云英遗传多样性分析和物种保护奠定了技术基础。