锥栗自然居群ISSR-PCR分析技术的建立

编号 zgly0001357192

文献类型 期刊论文

文献题名 锥栗自然居群ISSR-PCR分析技术的建立

作者 刘国彬  龚榜初  罗正荣 

作者单位 中国林业科学研究院亚热带林业研究所  华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室 

母体文献 果树学报 

年卷期 2009年01期

年份 2009 

分类号 S664.2 

关键词 锥栗  自然居群  ISSR 

文摘内容 提取野生锥栗的基因组DNA作为ISSR-PCR模板,对反应体系中的模板用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶用量5个主要影响因素进行梯度试验,并对扩增程序中的退火温度与循环次数进行了探讨,初步确立了适合野生锥栗的ISSR-PCR分析技术体系,即25μL反应体系中,模板DNA40或50ng、Mg2+2.25mmol.L-1、dNTPs0.2mmol.L-1、引物0.2μmol.L-1、TaqDNA聚合酶1.0U;PCR扩增程序为:94℃预变性3min;然后94℃变性45s,(Tm+2～4℃)退火45s,72℃延伸2min,共32个循环;最后72℃充分延伸5min;1.5%琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。