水葫芦苗ISSR-PCR体系的优化与引物筛选

编号 zgly0001566446

文献类型 期刊论文

文献题名 水葫芦苗ISSR-PCR体系的优化与引物筛选

作者 王建科  李毅  胡延萍  石琳  王钧  王莉 

作者单位 中国科学院西北高原生物研究所  中国科学院大学 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年08期

年份 2017 

分类号 Q943.2  S567.239 

关键词 水葫芦苗  ISSR-PCR  正交设计  体系优化 

文摘内容 以改良CTAB法提取水葫芦苗基因组DNA为模板,利用正交设计试验对影响ISSR-PCR反应体系的5个因素(TaqDNA聚合酶,dNTP,引物,模板及Mg2+)进行了优化筛选。经极差分析和方差分析,最终建立了水葫芦苗ISSR-PCR的最佳反应体系。结果表明,总体积20μL的反应体系中各因素浓度分别为:TaqDNA聚合酶0.025 U/μL、Mg2+1.5 mmol/L、dNTP 1.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 1.5 ng/μL。通过筛选得到10条扩增条带清晰的ISSR引物,并通过梯度PCR确定了各引物的最适退火温度。在此基础上对循环次数进行优化,最终确定最佳循环次数为40次。