β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体的构建

编号 zgly0000807171

文献类型 期刊论文

文献题名 β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体的构建

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 李夏  戴佳乐  陈子奇  付永平  马建  曲静  王丕武 

作者单位 吉林农业大学 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(10)

页码 191-198

年份 2012 

分类号 S565 

关键词 α′-亚基基因  ihp-RNAi表达载体  农杆菌介导法  大豆 

文摘内容 【目的】:构建β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因具有功能性间隔序列的发夹结构(Intron-hairpin RNAi, ihp-RNA)的RNA干扰(ihp-RNAi)表达载体并转化大豆, 为通过RNA干扰技术改良大豆的营养品质奠定基础。【方法】:以大豆总RNA反转录获得的cDNA为模板, 通过PCR扩增克隆了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的核心保守序列(400 bp), 并将该片段的反义和正义片段插入到重组植物表达载体p3301P的种子特异性启动子7αp下游, 将功能性间隔序列intron-SSR插入反义片段与正义片段之间, 构建α′-亚基基因ihp-RNAi安全型表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH, 并进行PCR及双酶切鉴定。利用农杆菌介导法将带有p3301-PFNZ-α′-BADH 的菌株转化“吉农27”大豆植株, 对转基因植株进行PCR、Southern杂交检测, 并对转基因植株α′-亚基基因的表达量进行RT-PCR。【结果】:成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体p3301-PFNZ-α′-BADH, 利用农杆菌介导法转化大豆得到7株阳性转化植株; Southern杂交结果显示, 外源基因以1～2个拷贝整合于大豆基因组中; RT-PCR检测表明, β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因的表达被明显抑制。【结论】:成功构建了β-伴大豆球蛋白α′-亚基基因ihp-RNAi表达载体, 获得了α′-亚基基因被明显抑制的转基因大豆植株, 为应用基因工程技术进行大豆品质改良奠定了基础。