利用常规PCR和实时荧光定量PCR检测杨梅凋萎病菌

编号 zgly0001514187

文献类型 期刊论文

文献题名 利用常规PCR和实时荧光定量PCR检测杨梅凋萎病菌

作者 任海英  戚行江  梁森苗  郑锡良 

作者单位 浙江省农业科学院园艺研究所 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2016年01期

年份 2016 

分类号 S436.67 

关键词 杨梅  凋萎病菌  常规PCR  SYBR Green实时荧光定量PCR  分子检测 

文摘内容 凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspora),本研究开发了常规PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.microspora(JN861776)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列的相同部分设计引物对(Pvm1L/Pvm1R)。该引物对利用常规PCR技术能特异性扩增出杨梅凋萎病菌188 bp的目标产物而对照菌株则呈阴性。该常规PCR体系能够检测人工接种后21 d和田间自然发病的有病症杨梅组织中的凋萎病菌,检测下限是0.6×10~5拷贝数。利用Pvm1L/Pvm1R进行SYBR Green实时荧光定量PCR,检测灵敏度是常规PCR的100倍,检测下限是0.6×10~3拷贝数,能够检测出人工接种及田间已经感染但尚未表现症状的杨梅组织中的凋萎病菌。这两项技术简单、快速、灵敏特异性强,可以应用于杨梅凋萎病的诊断和苗木检疫。