4种楠木AFLP反应体系优化建立

编号 zgly0001459595

文献类型 期刊论文

文献题名 4种楠木AFLP反应体系优化建立

作者 周生财  黄华宏  童再康  吴小林 

作者单位 浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地  浙江省庆元县实验林场 

母体文献 浙江农林大学学报 

年卷期 2013年05期

年份 2013 

分类号 S792.24 

关键词 林木育种学  浙江楠  紫楠  桢楠  闽楠  DNA提取  AFLP 

文摘内容 采用核酸电泳缓冲液(TNE)结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸(DNA)可满足扩增片段长度多态性(AFLP)分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3μL缓冲液4,0.3μL牛血清白蛋白(100×BSA),50nkat EcoRΙ,25 nkat MseΙ,双蒸水加至30.0μL放置37℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应(PCR)仪上65℃15min;连接反应20.0μL酶切产物,2.5μL T4缓冲液,666.8 nkat T4连接酶,5 pmol EcoRΙ接头,10 pmol MseΙ接头,双蒸水加至25.0μL,16℃连接过夜(10～14 h);预扩增反应2.0μL连接产物,2.0μL 10×缓冲液,31.25nmol镁离子,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,4 pmol脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP),预扩增引物(E+A,M+C)各6 pmol,双蒸水加至20.0μL;选扩增反应稀释40倍的预扩产物2.0μL,2.0μL 10×缓冲液,31.25 nmol镁离子,4 pmol dNTP,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,选扩增引物(M+CNN)15 pmol,选扩增引物(E+ANN)12 pmol,双蒸水加至20.0μL。利用上面体系在64对选扩引物中筛出13对适于浙江楠AFLP分析的最佳引物组合。