Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

编号 zgly0000524346

文献类型 期刊论文

文献题名 Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

学科分类 220.1040;森林土壤学

作者 管莉菠  蔡天明  李波  何健  李顺鹏  崔中利 

作者单位 南京农业大学生命科学学院微生物学系 

母体文献 土壤学报 

年卷期 2007,44(4)

页码 727-733

年份 2007 

分类号 S154.39 

关键词 多聚磷酸盐激酶  ppk全基因及上下游序列  快速染色体步移方法(SEFA—PCR) 

文摘内容 以一株高效聚磷菌Pseudomonas putida GM6为研究材料.为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp).随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adaptor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537).构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E. coli BL21(DE3)/ pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物.且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率.这表明ppk基因在E. coli中的过量表达,导致了E. coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐。