绿盲蝽磷脂酶C(AlPLC)的表达、纯化及酶学性质

编号 zgly0001563526

文献类型 期刊论文

文献题名 绿盲蝽磷脂酶C(AlPLC)的表达、纯化及酶学性质

作者 谭永安  赵旭东  郝德君  肖留斌  柏立新  赵静  孙洋  姜义平 

作者单位 江苏省农业科学院植物保护研究所  南京林业大学南方现代林业协同创新中心  南京林业大学林学院 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2017年11期

年份 2017 

分类号 S433 

关键词 绿盲蝽  磷脂酶C  原核表达  蛋白纯化  酶学特性  酶活性 

文摘内容 【目的】本文在前期获得绿盲蝽Apolygus lucorum磷脂酶C基因(Al PLC)的基础上,明晰Al PLC基因在绿盲蝽不同日龄若虫中的表达特征,阐明Al PLC重组蛋白的酶学性质。【方法】qRTPCR法分析1-13日龄绿盲蝽若虫Al PLC的表达量;构建含有Al PLC基因的原核表达载体p Czn1-Al PLC;进一步将该表达载体经IPTG诱导表达和蛋白纯化,获得具有磷脂酶活性的重组蛋白;以pNPPC(P-硝基苯基磷酸胆碱)为底物测定不同温度和不同p H下的重组Al PLC蛋白酶活性,最终确定了其酶活性的最佳p H和最适温度。【结果】Al PLC mRNA在绿盲蝽测定的若虫期持续表达,在4,8,12以及13日龄若虫中表达量相对较高。重组蛋白Al PLC可在大肠杆菌Escherichia coli中表达一个约79 k D的蛋白,12%SDS-PAGE显示该蛋白主要以包涵体形式存在;经过变性,复性获得具有磷脂酶活性的纯化蛋白。在蛋白浓度为0.25 mg/m L条件下,该酶最适温度为57℃(179.54±3.96 nmol/μg·min),最适p H为8.5(374.99±2.84 nmol/μg·min)。【结论】结果表明Al PLC在绿盲蝽若虫中表达具有特异的发育历期特性,获得的重组蛋白在较高温度和碱性环境下有较高磷脂酶活性。本研究结果为后续在蛋白水平上解析Al PLC的功能奠定基础。