紫花苜蓿DExD/H box RNA解旋酶基因的克隆与分析

编号 zgly0001459832

文献类型 期刊论文

文献题名 紫花苜蓿DExD/H box RNA解旋酶基因的克隆与分析

作者 高燕丽  龙瑞才  康俊梅  张铁军  杨青川  董宽虎 

作者单位 山西农业大学动物科技学院  中国农业科学院北京畜牧兽医研究所  重庆大学生命科学院 

母体文献 草地学报 

年卷期 2013年03期

年份 2013 

分类号 S541.9 

关键词 紫花苜蓿  解旋酶  亚细胞定位  烟草转化 

文摘内容 基于紫花苜蓿(Medicago sativa L.)盐胁迫抑制消减杂交文库中的一条EST序列,使用RACE技术克隆得到一条1678bp的cDNA序列。核酸序列分析表明该cDNA序列包含一个1281bp的最大开放阅读框,编码426个氨基酸,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)RNA解旋酶RH15和RH56的氨基酸序列相似性在90%以上,将该基因命名为MsRH(GenBank序列号:JX508648)。对此基因编码蛋白进行结构域预测表明其含有明显的DEXDc和HELICc结构域,预测其为DExD/H box RNA解旋酶。洋葱(Allium cepa)表皮细胞亚细胞定位分析表明MsRH定位于细胞核。为进一步研究此基因的功能,构建了MsRH基因的超表达载体pBI-MsRH,使用农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tobacum),筛选得到5株具有卡那霉素抗性再生烟草植株。PCR和RT-PCR检测结果表明MsRH基因成功插入烟草基因组中并表达。使用250mM NaCl处理7d后,转基因烟草中脯氨酸含量低于野生型烟草,而丙二醛和相对电导率则高于野生型烟草。初步试验结果表明转MsRH基因烟草对盐敏感性升高。