青稞黑穗病菌LAMP检测体系的建立

编号 zgly0001733736

文献类型 期刊论文

文献题名 青稞黑穗病菌LAMP检测体系的建立

作者 杨帆  胡章薇  严浩浩  刘耀霞  张学飞  闫佳会  侯璐  姚强 

作者单位 青海大学农林科学院青海省农业有害生物综合治理重点实验室/农业农村部西宁作物有害生物科学观测实验站 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2021,(09)

页码 1-10

年份 2021 

分类号 S435.123 

关键词 大麦坚黑粉菌  裸黑粉菌  青稞黑穗病  环介导等温扩增技术 

文摘内容 [目的]大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)是引起青藏高原青稞黑穗病的主要病原菌,建立快速、简便、特异性强的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌环介导等温扩增技术(LAMP)检测体系,检测青稞种子的带菌量,再依据带菌程度进行播前种子处理,是控制青稞黑穗病的重要技术手段。[方法]根据大麦坚黑粉菌(Ustilago hordei)和裸黑粉菌(Ustilago nuda)的ITS基因序列与其他对照菌株同源性低的区段设计并获得有效引物1组,建立LAMP检测体系,并选取影响LAMP反应体系的5个主要因素dNTPs、甜菜碱、镁离子、Bst DNA聚合酶及温度进行单因素试验对其进行优化,最后对优化后的LAMP检测体系进行灵敏度和特异性检测。[结果]建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,其优化后dNTPs浓度为1.8 mmol/L、甜菜碱浓度为0.8 mmol/L、镁离子浓度为10 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL,反应温度为65℃。应用该体系在45 min内能检测出2×10~(-4) ng/μL的裸黑粉菌,在60 min内能检测出2×10~(-4) ng/μL的大麦坚黑粉菌,即在60 min内可检测出2×10~(-4) ng/μL的大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌。建立的青稞黑穗病菌LAMP检测体系对大麦坚黑粉菌和裸黑粉菌具有特异性。[结论]建立了青稞黑穗病菌的LAMP检测体系,该体系能在1 h内检测出2×10~(-4) ng/μL的裸黑粉菌和大麦坚黑粉菌。