一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法(摘要)(英文)

编号 zgly0000682328

文献类型 期刊论文

文献题名 一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法(摘要)(英文)

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 徐平丽  赵晋平  孟静静  李保龙  李新国  郭峰 

作者单位 山东省农业科学院高新技术研究中心  山东省曹县种子公司 

母体文献 农业科学与技术: 英文版 

年卷期 2010,11(3)

页码 41-42,155

年份 2010 

分类号 S792.14 

关键词 拟南芥  PCR  DNA快速提取 

文摘内容 [目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进(省去液氮研磨和苯酚提取的步骤),获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法。于1.5ml Eppendorf管内加入400μl DNA提取液[内含200 mmol/LTri(pH值7.5),25 mmol/LEDTA(pH值8.0),250 mmol/LNaCl,0.5% SDS(W/V)],剪取拟南芥叶片材料少许(1片以下)加入400μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3 ～5 min;加入400μl氯仿/异戊醇(体积比24: 1),混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100μl灭菌超纯水溶解,4℃放置备用。以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。