编号 zgly0001263288
文献类型 期刊论文
文献题名 刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化
作者单位 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 湖北武汉430070 贵州大学农学院 贵州贵阳550025 湖北武汉430070
母体文献 果树学报
年卷期 2003年01期
年份 2003
分类号 Q943
关键词 刺梨 近缘种 PCR扩增 实验体系
文摘内容 以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。