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刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化



编号 zgly0001263288

文献类型 期刊论文

文献题名 刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化

作者 文晓鹏  2邓秀新 

作者单位 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室  华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 湖北武汉430070  贵州大学农学院  贵州贵阳550025  湖北武汉430070 

母体文献 果树学报 

年卷期 2003年01期

年份 2003 

分类号 Q943 

关键词 刺梨  近缘种  PCR扩增  实验体系 

文摘内容 以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。

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