银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定

编号 zgly0001433484

文献类型 期刊论文

文献题名 银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定

作者 聂燕华  林俊芳  王杰  尤琳烽  郭丽琼 

作者单位 华南农业大学食品学院生物工程系  广东农工商职业技术学院热作系  华南农业大学生物质能研究所 

母体文献 食用菌学报 

年卷期 2012年02期

年份 2012 

分类号 S567.34 

关键词 银耳  芽孢  gpd启动子  反向长距离PCR  多功能纤维素酶 

文摘内容 利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885bp的大片段gpd启动子表达活性更高。