山羊瘤胃上皮细胞和空肠黏膜上皮细胞原代培养技术研究

编号 zgly0001382777

文献类型 期刊论文

文献题名 山羊瘤胃上皮细胞和空肠黏膜上皮细胞原代培养技术研究

作者 孙志洪  张庆丽  贺志雄  韩雪峰  谭支良  张恩平  汤少勋  周传社  王敏 

作者单位 中国科学院亚热带农业生态研究所  亚热带农业生态过程重点实验室  中国科学院研究生院  西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 动物营养学报 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S827.5 

关键词 反刍动物  原代细胞培养  瘤胃  空肠  山羊 

文摘内容 本研究旨在建立山羊瘤胃上皮细胞(ruminal epithelium cell,REC)和空肠黏膜上皮细胞(jejunum epithelial cell,JEC)的原代培养方法。首先进行胃肠道微生物去除的研究,设计9种不同种类和剂量的抗生素洗涤液,按随机区组原则冲洗采集到的瘤胃上皮和空肠黏膜。根据微生物去除试验结果,选择最佳种类和剂量的抗生素洗涤液对瘤胃上皮和空肠黏膜进行洗涤,然后采用不同的方法对REC和JMC进行分离与培养,根据分离所获的细胞特征以及细胞增殖活性结果确定适合山羊瘤胃上皮和空肠黏膜特性的分离方法。结果表明,为有效去除黏附的微生物,瘤胃上皮需分别经过5倍青链霉素和2倍庆大两性霉素洗涤液的冲洗,而空肠黏膜需分别经过5倍青链霉素和5倍庆大两性霉素洗涤液的冲洗。瘤胃上皮和空肠黏膜分别经2.50%胰蛋白酶+0.02%EDTA和0.20%Ⅳ型胶原酶+0.50mmol/LCaCl2消化后可获得理想的细胞分离效果以及细胞增殖活性。本研究结果提示,根据胃肠道微生物的组成特征以及组织特性选择所确定的抗生素洗涤液以及组织细胞分离方法可用于山羊REC和JEC的原代培养。