两种葡萄溃疡病菌双重PCR检测方法的建立与应用

编号 zgly0001554606

文献类型 期刊论文

文献题名 两种葡萄溃疡病菌双重PCR检测方法的建立与应用

作者 张玮  李兴红  郭飞飞  刘梅  黄金宝  燕继晔 

作者单位 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所  中国农业大学植物保护学院 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2017年04期

年份 2017 

分类号 S436.631.1 

关键词 葡萄  葡萄座腔菌  小新壳梭孢  双重PCR检测 

文摘内容 为快速准确地鉴定出2种不同的葡萄溃疡病菌——葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea和小新壳梭孢Neofusicoccum parvum,根据Gen Bank中已报道的引起我国葡萄溃疡病的6个主要种的延伸因子-1序列及β-微管蛋白序列分别设计了葡萄座腔菌和小新壳梭孢的特异性引物B.d-F/B.d-R及N.p-F/N.p-R,建立了双重PCR检测方法,并对田间病样进行检测。结果表明,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R可以分别在葡萄座腔菌和小新壳梭孢中扩增到324 bp和212 bp的特异性条带,检测灵敏度均为10 pg。双重PCR检测体系中Taq DNA聚合酶的最佳用量为0.05 U/μL,引物B.d-F/B.d-R和N.p-F/N.p-R的最佳终浓度均为0.2μmol/L,最适退火温度和退火时间分别为58℃和30 s。对田间葡萄病样的检测结果与室内病样常规病原菌分离结果一致。表明该双重PCR检测方法能够同时检测葡萄座腔菌和小新壳梭孢,有助于快速、灵敏地检测葡萄苗木的带菌情况。