基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

编号 zgly0001542904

文献类型 期刊论文

文献题名 基于毛细管电泳的日本落叶松MSAP反应体系的建立

作者 刁姝  孙超  孙晓梅  张守攻 

作者单位 中国林业科学研究院林业研究所国家林业局林木培育重点实验室 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2017年03期

年份 2017 

分类号 S791.223 

关键词 DNA甲基化  甲基化敏感扩增多态性(MSAP)  毛细管电泳  体系建立  日本落叶松 

文摘内容 [目的]建立基于毛细管电泳的日本落叶松最佳MSAP反应体系,获得条带清晰,信号强度均一的DNA甲基化图谱,为今后开展日本落叶松表观遗传变异研究奠定基础。[方法]以日本落叶松未成熟木质部为试材,设置不同梯度的DNA模板用量以及选择扩增体系中引物浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度和exTaq DNA聚合酶浓度,确定各组分不同用量对毛细管电泳效果的影响,从而确立最适的MSAP反应体系。[结果]结果表明模板DNA以及exTaq DNA聚合酶浓度对毛细管电泳结果影响不明显,而高的引物浓度会引起条带的减少。Mg2+及dNTP浓度是影响毛细管电泳结果最为关键的因素,浓度过低或过高会导致毛细管电泳图谱条带明显减少,杂峰显著增多。[结论]最终确立的反应体系为:DNA模板100 ng,引物0.75 pmol·μL-1,Mg2+2 mmol·L-1,dNTP 0.375 mmol·L-1和exTaq DNA聚合酶0.05 U·μL-1。