割手密线粒体DNA的简易快速提取方法

编号 zgly0001496203

文献类型 期刊论文

文献题名 割手密线粒体DNA的简易快速提取方法

作者 田春艳  王先宏  李富生  何丽莲  娄红波  杨清辉  肖关丽  唐荣平 

作者单位 云南农业大学甘蔗研究所  云南临沧高等师范专科学校数理系 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2015年05期

年份 2015 

分类号 S566.1 

关键词 甘蔗  割手密  线粒体DNA  提取方法 

文摘内容 高效快速地分离提取高质量的线粒体DNA(mtDNA)是研究植物线粒体基因及其起源进化的重要前提。为获得高质量的mtDNA进行割手密资源的线粒体基因序列扩增及测序分析,本研究以割手密黄化苗为材料,通过简单差速离心分离得到线粒体,经DNaseⅠ消化处理,去除核DNA杂质得到较纯的线粒体,然后经过5%SDS和蛋白酶K充分裂解线粒体,利用饱和的苯酚/氯仿(1:1)和氯仿两次抽提除去蛋白质,并经过RNase A的消化处理除去RNA,无水乙醇沉淀等一系列操作得到mtDNA。所提取的mtDNA样品经紫外吸收光度测定,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增分析其浓度和纯度,结果表明利用该方法提取的mtDNA纯度高,完全能满足后续PCR分析及分子克隆测序的要求。该方法不仅DNA提取纯度高,操作简单、快速经济,可为今后开展甘蔗及其各野生种的研究提供技术支持。