柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达

编号 zgly0001400762

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达

作者 程军  董辉  郭涛  韩红玉  姜连连  赵其平  朱顺海  马卫娇  曾艳波  孔春林  李婷  黄兵 

作者单位 上海师范大学生命与环境科学学院  中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2011年01期

年份 2011 

分类号 S852.7 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  抗药性  地克珠利  马杜拉霉素  实时荧光定量PCR 

文摘内容 利用前期构建的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株与各自母株之间的抑制性消减文库而获得的ESTs序列,选择其中一个差异表达的EST序列(克隆号为M20),采用RACE技术,以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA为模板,扩增获得了该基因的全长cDNA序列,命名为M20,该基因全长847 bp,包括一个525 bp的开放阅读框,编码174个氨基酸,预测理论分子量约为19 ku。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在敏感株中表达量高于地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株;在不同发育阶段中,未孢子化卵囊表达量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子阶段虫体。将该基因克隆于原核表达质粒pET28b中,构建重组质粒pET28b-M20,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,分子量约约为23 ku,该蛋白以包涵体形式存在,在IPTG诱导8 h后表达稳定,Western blot检测表明,其具有较好的免疫原性。