水貂IFN-α、IFN-β及IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001495948

文献类型 期刊论文

文献题名 水貂IFN-α、IFN-β及IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者 王洋  胡博  张海玲  鲁荣光  吕爽  刘昊  孙彦刚  马凡舒  赵建军  张蕾  薛向红  史宁  白雪  徐淑娟  范思宁  凌明玉  李欣彤  闫喜军 

作者单位 中国农业科学院特产研究所经济动物疫病研究室  吉林农业大学动物科学技术学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2015年11期

年份 2015 

分类号 S865.22 

关键词 SYBR GreenⅠ  实时荧光定量PCR  水貂  α干扰素  β干扰素  γ干扰素 

文摘内容 为采用SYBR GreenⅠ染料建立检测水貂IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中登录的MiIFN-α和MiIFN-β、MiIFN-γ和3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因序列,分别设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增MiIFN-α、MiIFN-β、MiIFN-γ和MiGAPDH的基因片段,构建到pMD18-T载体中制备质粒标准品,建立了相应基因mRNA的荧光定量RT-PCR检测方法并建立标准曲线。结果表明,MiGAPDH、MiIFN-α和MiIFN-β和MiIFN-γ基因的Ct值与标准品稀释度在10拷贝质粒/μL~107拷贝质粒/μL内均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均为1.00,熔解曲线均呈单一熔解峰,检测下限为10拷贝质粒/μL,重复性试验表明组内、组间变异系数均小于4.5%。临床样品检测结果表明水貂感染肠炎病毒后,MiIFN-α、MiIFN-β和MiIFNγ相对表达水平均在6d达到最高峰值,MiIFN-α相对表达量要比MiIFN-β和MiIFN-γ相对表达量高两个数量级,并且在感染期(4d~6d)MiIFN-α相对表达量明显提高。本研究为水貂IFN mRNA的定量分析提供了有效工具。