龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析

编号 zgly0001643815

文献类型 期刊论文

文献题名 龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析

作者 张清林  苏立遥  厉雪  张舒婷  徐小萍  陈晓慧  王培育  李蓉  张梓浩  陈裕坤  赖钟雄  林玉玲 

作者单位 福建农林大学园艺植物生物工程研究所 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2018年08期

年份 2018 

分类号 S667.2 

关键词 龙眼  miR166初级体  启动子  实时荧光定量PCR  表达特性 

文摘内容 为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMARTTM RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体（Pri-miR166 S53）,确认其转录起始位点,并预测其含有的潜在ORF;利用龙眼基因组数据库提取其启动子序列,预测其含有的顺式作用元件;用实时荧光定量PCR对龙眼体胚发生早期及不同激素处理下的胚性愈伤组织中miR166基因的前体（Pre-miR166 S53）和成熟体（miR166a.2）表达模式进行分析。结果表明:获得长317 bp的Pri-miR166 S53基因初级体序列,对其进行翻译,得到一条长13个氨基酸序列的miPEP（MLCFVDALFLIST）。利用生物信息学软件分析Pri-miR166 S53基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有生长素、脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯及spl、HSE等特异作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,在2,4-D调控的龙眼体胚发生早期过程中,从胚性松散型愈伤组织发育到球形胚的过程中,Pri-miR166 S53基因的前体pre-miR166 S53和成熟体miR166a.2都表现为下调趋势;而在无2,4-D调控的龙眼体胚发生早期中,pre-miR166 S53和miR166a.2表达模式不同。此外,pre-miR166S53随ABA和乙烯处理浓度升高呈下调表达,而对不同浓度2,4-D处理无应答;miR166a.2随2,4-D、ABA处理浓度升高呈下调表达,而在乙烯处理下呈上调表达。上述研究结果提示miR166前体和成熟体在对外源激素应答的模式上并不呈简单线性相关,可能存在多层次、多方位的调控。