苜蓿根瘤菌cfp荧光标记株的构建及筛选方法

编号 zgly0001617669

文献类型 期刊论文

文献题名 苜蓿根瘤菌cfp荧光标记株的构建及筛选方法

作者 张淑卿  李剑峰  陈力玉  师尚礼  苗阳阳 

作者单位 贵州师范学院地理与旅游学院  贵州师范学院喀斯特生境土壤与环境生物修复研究所  甘肃农业大学草业生态系统教育部重点实验室  中国草学会 

母体文献 草业科学 

年卷期 2015年05期

年份 2015 

分类号 S541.9  Q939.114 

关键词 苜蓿根瘤菌  荧光标记  三亲本杂交  菌种筛选  根瘤 

文摘内容 荧光标记根瘤菌在研究根瘤菌侵染宿主形成结瘤时具有良好的示踪效果。本研究以辅助菌株Escherichia coli pRK2073,受体菌苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 12531和苜蓿根瘤菌Rhizobium meliloti GN5,及cfp青色荧光基因供体菌E.coli pMP45179为供试菌株,以三亲本杂交法进行结合转导,并以无氮培养基和TY培养基对标记菌株进行荧光表达及固氮特性的遗传稳定性检测,再对初选菌株以甘农5号紫花苜蓿为宿主进行回接验证,测定了回接植株的生物量,结瘤数和标记菌的占瘤率等指标。结果表明,1)三亲本杂交转导法适用于苜蓿根瘤菌cfp标记菌株的构建,获得大量S.meliloti 12531和R.meliloti GN5的荧光标记株;2)经逐层筛选获得的荧光标记菌中,S.meliloti 12531-cfp6和R.meliloti GNf-cfp5遗传稳定性好,荧光表达量高,结瘤促生能力强;3)与现有抗生素平板分离筛选相比,无氮培养基结合耐药平板筛选能显著提高荧光标记根瘤菌株的甄别筛选效率;4)三亲本杂交法获得的苜蓿根瘤菌荧光标记株个体间差异较大,对标记株固氮及荧光表达能力遗传稳定性的验证和对宿主植物的结瘤促生能力的检测是cfp荧光标记根瘤菌筛选的必要手段。