禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达

编号 zgly0000556737

文献类型 期刊论文

文献题名 禽流感病毒M2e基因与鸡IgG Fc基因在巴斯德毕赤酵母中的融合表达

作者 尚书文  侯继波  徐公豹  牛明福  王秀清  何家惠  陈溥言  姜平 

作者单位 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室  江苏省农业科学院兽医研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报 

年卷期 2008,36(1)

页码 17-22

年份 2008 

分类号 S852.659.5  Q786 

关键词 禽流感病毒  M2e基因  鸡IgG  Fc基因  巴斯德毕赤酵母 

文摘内容 【目的】得到融合蛋白M2e-Fc，并检测其免疫学特性，为研制禽流感通用疫苗奠定基础。【方法】根据禽流感病毒H5N1的M2e蛋白氨基酸序列设计2条长互补引物，通过重叠区互补扩增基因法扩增出目的基因M2e，然后与鸡IgGFc片段基因一起克隆人毕赤酵母表达质粒中，构建酵母表达载体。将阳性质粒线性化后电转化人感受态毕赤酵母X-33中，再经甲醇诱导后，通过Tricine-SDS-PAGE电泳及Western—blotting鉴定融合蛋白。之后用其免疫非免疫鸡，检验其免疫原性。【结果】成功构建了表达M2e和Fc融合蛋白的酵母表达载体pPICZαA-M2-Fc，并通过Zeocin筛选及PCR鉴定出了阳性重组子；阳性重组子经甲醇诱导后得到融合蛋白，Tricine-SDS-PAGE电泳及Western-blotting鉴定证实，融合蛋白得到正确表达，并且可以与M2e阳性血清反应。动物免疫试验证实，该融合蛋白可以诱导鸡产生抗M2e抗体，具有良好的免疫原性。【结论】融合蛋白M2e-Fc在巴斯德毕赤酵母表达系统中得到了成功表达，该融合蛋白具有较好的免疫原性，为后期进行其他免疫试验奠定了基础。