松材线虫Bxpel2基因的克隆及RNA干扰载体构建

编号 zgly0001501692

文献类型 期刊论文

文献题名 松材线虫Bxpel2基因的克隆及RNA干扰载体构建

作者 邱秀文  吴小芹  黄麟  叶建仁 

作者单位 九江学院鄱阳湖生态经济研究中心  江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室南京林业大学林学院 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S763.18 

关键词 松材线虫  Bxpel2基因  RNA干扰 

文摘内容 [目的]为了构建松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)果胶酶Bxpel2基因干扰载体。[方法]通过Trizol法提取松材线虫总RNA,反转录合成c DNA,设计带T7启动子的果胶酶Bxpel2基因引物,以c DNA为模板扩增出果胶酶Bxpel2基因片段,连接到RNA干扰载体,再以干扰载体为模板,PCR扩增出目的片段后进行测序鉴定,合成果胶酶Bxpel2基因双链RNA(dsRNA),采用RT-PCR检测松材线虫Bxpel2基因干扰后的表达情况。[结果]表明:1)提取的松材线虫总RNA完整性好,无降解;2)成功克隆出松材线虫果胶酶Bxpel2基因片段(790 bp)并将其连接至p MD19-T载体;3)以RNA干扰载体为模板合成dsRNA,浓度分别为1.313 mg·m L-1和1.152 mg·m L-1;4)RT-PCR结果显示,松材线虫经过dsRNA干扰后,Bxpel2基因表达基本受到抑制。[结论]成功构建松材线虫果胶酶Bxpel2基因干扰载体,为进一步研究Bxpel2基因在松材线虫致病过程中的作用和功能奠定了良好的基础。