珍珠黄杨ITS-PCR体系的建立与优化

编号 zgly0000637641

文献类型 期刊论文

文献题名 珍珠黄杨ITS-PCR体系的建立与优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 刘娜娜  季孔庶 

作者单位 南京林业大学森林资源与环境学院 

母体文献 基因组学与应用生物学 

年卷期 2009,28(5)

页码 975-980

年份 2009 

分类号 S792.99  X703.1 

关键词 珍珠黄杨  CTAB  ITS-PCR反应体系  起源进化 

文摘内容 本研究利用改良CTAB法从珍珠黄杨叶片中提取基因组DNA作为模板,在TaqDNA聚合酶量不变的基础上,利用正交设计L9（34）对4个因素（模板DNA、Mg2＋、dNTP和引物）在3个水平上对珍珠黄杨ITS-PCR反应体系进行优化。实验结果表明,在总体积50μL的反应体系中,建立了最佳ITS-PCR扩增条件：Mg2＋浓度2.0mmol/L、引物浓度0.3μmol/L、dNTP浓度0.3mmol/L、DNA模板浓度240ng/50μL、TaqDNA聚合酶的用量1.75U/50μL和退火温度56℃,该优化体系保证了珍珠黄杨ITS-PCR产物的纯度和质量要求。珍珠黄杨ITS片段克隆测序后获得的序列长度为642bp,其系统学信息将为珍珠黄杨的起源进化提供有力的分子水平证据。