基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

编号 zgly0001383022

文献类型 期刊论文

文献题名 基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

作者 巢伟  刘永杰  陆承平 

作者单位 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2010年09期

年份 2010 

分类号 Q78 

关键词 嗜水气单胞菌  基因组步移  脂酶 

文摘内容 根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建6个不同的基因组步移文库,再以基因组步移文库为模板,设计引物向已获得的保守片段两侧进行PCR扩增,将扩增到的两侧序列与保守片段拼接后得到一个3 476 bp的片段,通过DNA Star软件分析,找到一个2 415 bp的开放阅读框,经Blast软件分析,其与嗜水气单胞菌ATCC 7966脂酶、嗜水气单胞菌AH-3磷脂酶A1、嗜水气单胞菌H3脂酶、嗜水气单胞菌Mcc-2脂酶、嗜水气单胞菌J MP636磷脂酶C的序列同源性分别为97%、97%、88%、83%和82%。将DNA序列翻译成氨基酸序列后,发现其包含一个多肽序列(VHFLGHSLGA),这个序列在脂酶中高度保守。