一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统

编号 zgly0001660515

文献类型 期刊论文

文献题名 一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统

作者 何佳宁  牛雪梅 

作者单位 云南大学省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2019年02期

年份 2019 

分类号 Q933 

关键词 嗜热真菌  杜邦嗜热菌  原生质体转化  基因敲除  生物合成基因 

文摘内容 以嗜热真菌杜邦嗜热菌ThermomycesdupontiiNRRL2155为研究材料,利用同源重组原理和真菌原生质体转化方法,以潮霉素抗性基因替换嗜热真菌目标基因,获得抗潮霉素的靶向基因敲除突变菌株。优化的遗传转化体系为:用15mg/mL裂解酶,在28℃下酶解2g杜邦嗜热菌菌丝5.5h以获得原生质体,经STC缓冲液洗涤重悬后,利用PEG(polyethylene glycol)介导的遗传转化方式,将10μg线性敲除全长片段转化至杜邦嗜热菌原生质体中,通过潮霉素筛选及PCR验证得到基因替换突变菌株,同源重组率达到20%。本研究首次将原生质体转化方法应用在杜邦嗜热菌,并成功建立稳定高效的基因替换体系,为快速构建杜邦嗜热菌的遗传转化体系和研究该嗜热真菌的基因功能提供有效方法。