茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析

编号 zgly0000807168

文献类型 期刊论文

文献题名 茶树CsCBF1基因表达载体的构建及其转基因烟草的抗寒性分析

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 常欣  庞磊  李叶云  魏艳丽  江昌俊 

作者单位 安徽农业大学茶与食品科技学院茶叶生物化学与生物技术教育部农业部重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2012(10)

页码 173-179

年份 2012 

分类号 S571.1 Q78 

关键词 茶树  烟草  CsCBF1基因  抗寒性 

文摘内容 【目的】:通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能, 为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】: 利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草, 通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0 ℃下处理48 h后, 检测其膜质通透性、丙二醛(MDA)含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm, 并将0 ℃处理3 d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25 ℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】: 成功构建表达载体pBI121-CsCBF1, PCR、RT-PCR和GUS活性染色证明, CsCBF1已整合到烟草基因组中并转录表达。25 ℃处理下, 转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草的膜质通透性、丙二醛含量和Fv/Fm均无显著差异, 而在4和0 ℃处理下, 转pBI121-CsCBF1型烟草的膜质通透性和丙二醛含量均显著低于转pBI121型和野生型烟草, 但Fv/Fm显著高于转pBI121型和野生型烟草。生长恢复试验中, 转pBI121-CsCBF1型的存活率为66.7%, 而野生型仅为23.3%。【结论】: 茶树CsCBF1基因能够显著增强非低温驯化植物烟草的抗寒性, 说明茶树CsCBF1基因存在于细胞抗寒的分子调控途径中, 从而提高植物细胞的低温防御能力。