转人抑癌基因p53鸡的研究

编号 zgly0001671661

文献类型 期刊论文

文献题名 转人抑癌基因p53鸡的研究

作者 李鹏姗  雷雪芹  徐廷生  王攀林  宋祯  李振红  史明艳  韦光辉  张广平  李俊堂 

作者单位 河南科技大学动物科技学院  洛阳师范学院生命科学学院  河南科技学院动物科技学院  河南科技大学第一附属医院  全军肛肠外科研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2019年07期

年份 2019 

分类号 S831.2 

关键词 重组真核表达载体  Hep3B  转基因鸡  p53基因  转染率  世代遗传率 

文摘内容 【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P<0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P<0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。