秦烟遗传转化体系的优化

编号 zgly0001334688

文献类型 期刊论文

文献题名 秦烟遗传转化体系的优化

作者 孔娜  朱锦辉  陈耀锋  任慧莉  郭东伟 

作者单位 西北农林科技大学农学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年09期

年份 2008 

分类号 S572 

关键词 烟草  HAL1基因  根癌农杆菌介导法  秦烟98 

文摘内容 【目的】优化烟草的高效遗传转化体系。【方法】以陕西地区广泛种植的烟草品种秦烟98为试材,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将从酿酒酵母细胞中克隆到的具有较强耐盐表型的HAL1基因进行遗传转化,对农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素进行研究。【结果】用50 mg/L卡那霉素(Kan)筛选转化外植体用800 mg/L羧苄青霉素(Cb)除菌可以获得理想的筛选和除菌效果。以优化的农杆菌介导烟草叶片的遗传转化条件为:将未经过预培养(预培养0 d)的外植体用稀释150倍的农杆菌菌液(OD600=0.5)浸泡1min,转至MS1培养基上共培养48 h,用无菌水冲洗后于体积分数2%NaClO中浸泡15 min,用无菌水冲洗4~5次,置800 mg/L Cb+质量分数0.1%的甘露醇中浸泡约12 h除菌。【结论】获得了农杆菌介导烟草叶片遗传转化的最佳优化条件,有效地减少了外植体的污染率,提高了抗性芽分化率。