斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立

编号 zgly0001573544

文献类型 期刊论文

文献题名 斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立

作者 房艳华  韦小敏  李肖  来航线  马小娟 

作者单位 西北农林科技大学资源环境学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2018年03期

年份 2018 

分类号 Q936 

关键词 斜卧青霉  染色质免疫共沉淀  交联  菌悬液浓度  超声条件 

文摘内容 【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进行解交联染色体检验,研究不同交联时间(5,10,20,30,40min)、不同菌丝用量(10mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50g菌丝)及不同超声功率(15,20,25,30 W)、超声时间(1,3,5s)、超声间隔时间(10,20,30,40s)、超声次数(15,25,30,40次)对试验效果的影响。在优化的条件下对菌丝进行处理,获得合格的DNA片段,进行CHIP试验,采用随机PCR方法检测染色质免疫共沉淀效果。【结果】适用于斜卧青霉Hac1的最佳染色质免疫共沉淀试验的条件为:交联时间控制在20min以内;最佳菌丝用量为10mL CHIP缓冲液中加入1g菌丝;25 W超声功率,工作时间5s,间隔时间40s,超声30次。在优化的条件下富集DNA片段,进行随机PCR,结果在500~750bp间可见明显的扩增条带。【结论】优化了斜卧青霉转录调控因子Hac1CHIP条件,成功进行了CHIP试验。