内参基因加标法定量土壤微生物目标基因绝对拷贝数

编号 zgly0001007050

文献类型 期刊论文

文献题名 内参基因加标法定量土壤微生物目标基因绝对拷贝数

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王行  曹萍麟  张志剑 

作者单位 国家高原湿地研究中心西南林业大学  浙江大学环境科学研究所环境与资源学院 

母体文献 微生物学通报 

年卷期 2016(2)

页码 424-433

年份 2016 

关键词 土壤  含水率  DNA得率  定量PCR  绝对定量  内参基因  腐殖酸抑制 

文摘内容 【目的】通过荧光定量PCR技术对土壤微生物目标基因进行绝对定量,其定量结果的准确性容易受到DNA提取得率以及腐殖酸抑制性的影响。【方法】采用内参基因加标法,利用构建的突变质粒DNA,对供试水稻土壤样品中的微生物16S r RNA目标基因的绝对拷贝数进行荧光定量PCR检测,用来表征该样品中细菌群落总体丰度。在定量前通过双向引物扩增方法验证突变质粒中的内参基因对供试土壤的特异性。【结果】不同水稻土壤样品的DNA提取量在样品间差异较大。通过内参基因加标法对DNA提取量进行校正,显著提高了16S r RNA基因绝对定量的精确度。不同水稻土壤样品间的变异系数为17.8,与未加标处理相比降低了66.7%。