4种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较

编号 zgly0000823810

文献类型 期刊论文

文献题名 4种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较

作者 孙秀梅  程帆  刘维  孙涛  薛秀恒  李培英  王菊花 

作者单位 安徽农业大学动物科技学院  安徽农业大学茶与食品科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2013(5)

页码 25-31

年份 2013 

分类号 Q813.11 

关键词 小鼠  小肠上皮细胞  原代培养  组织块分离培养法  酶学分离培养法 

文摘内容 【目的】:比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)分离方法的分离效果,建立小鼠IECs的有效分离培养方法,获得小鼠IECs原代细胞,为后续研究做准备。【方法】:分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法以及胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ联合消化法共4种方法分离小鼠IECs并培养,通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的IECs进行细胞特异性鉴定,比较4种方法的分离效果。【结果】:组织块培养法所获IECs活力好,增殖能力强,但成纤维细胞污染较严重,细胞纯度低;胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ分离法获得的IECs数量少且细胞增殖能力弱;嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶Ⅰ联合消化法所获得的小鼠IECs纯度较高,原代培养时增殖能力稍弱于组织块培养法,但传代后增殖能力趋于稳定。通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的细胞进行鉴定,结果表明,分离的细胞多数为小鼠IECs。【结论】:嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶Ⅰ联合消化法均适合肠道上皮细胞的分离和培养。