毛白杨高效转化系统的研究

编号 zgly0000246550

文献类型 期刊论文

文献题名 毛白杨高效转化系统的研究

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 杨春玲  祖国诚 

作者单位 中国科学院遗传研究所 

母体文献 DEVELOPMENTAL AND REPRODUCTIVE BIOLOGY;发育与生殖生物学报 

年卷期 2001,10(1)

页码 61-68

年份 2001 

分类号 S792.117 

关键词 毛白杨  高效转化系统  农杆菌 

文摘内容 毛白杨是一种具有多种优良特性, 用途广泛并有重要经济价值的杨属树种, 又是农杆菌的天然寄生植物, 因此, 毛白杨一直是进行木本植物组培及遗传转化研究的重要对象, 本研究通过比较培养基组成(Table 1), 外植体类型(Table 2), 农杆菌侵染浓度以及预培养(Table 3&4,Fig.1)和共培养条件(Table5)等影响农杆菌转化及植株再生效率的诸多重要条件后, 建立了毛白杨的农杆菌高效转化系统。实验选用毛白杨叶片为外植体, 在MS+4.0/L2,4-D+1.0mg/L 6-BA培养基上预培养2d后制成叶盘, 并做戳伤处理, 再与5×10^8Cell/mL浓度的农村菌新鲜菌液共培养2d, 然后以MS+4.0mg/L,2,4-D+1.0mg/L 6-BA附加50 mg/L kM和1000mg/L AP为筛选培养基(Table 6,Fig.4), 获得最佳转化效果, 2-3周后, 在叶盘周围长出许多Km抗性愈伤组织, 转入分化培养基分化后, 再转入生根培养基3-4周, 获得完整植株(Fig.3)。经PCR扩增实验鉴定, 转化愈伤组织的阳性率达到83.8%(Fig.2), 多次重复实验结果表明, 该转化系统与以往的文献报道相比, 其遗传转化率大大提高。抗性愈伤组织的平均转化率高达56.2%。最终得到的再生转化植的比率达19.9%, 其中, 毛白杨叶盘经戳伤处理, 其转化率可提高至20-40%(Table 7), 利用此转化系统我们已将免防御素NP-1广谱抗病基因成功的导入毛白杨, 并获得大量的转化再生植株。