酵母端粒酶RNA的制备及其构型影响因素分析

编号 zgly0000831519

文献类型 期刊论文

文献题名 酵母端粒酶RNA的制备及其构型影响因素分析

作者 谢艳  傅晶  奚绪光  李科友 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报: 自然科学版 

年卷期 2014(4)

页码 187-193

年份 2014 

分类号 Q752 

关键词 体外转录  端粒酶RNA  端粒  端粒酶相关蛋白p65 

文摘内容 【目的】:体外转录并纯化酵母端粒酶RNA, 明确缓冲液中组分对其构型的影响, 初步研究四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶RNA的结合情况, 为酵母端粒酶活性鉴定及构型功能研究奠定基础。【方法】:利用核酶的自剪切功能, 通过在3′端引入HDV核酶序列获得完整的酵母端粒酶RNA; 并用分子筛SuperDeX-200/16/60凝胶过滤纯化酵母端粒酶RNA; 琼脂糖凝胶电泳检测RNA Buffer组分中NaCl和MgCl2浓度对酵母端粒酶RNA构型的影响; 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测四膜虫端粒酶相关蛋白p65与酵母端粒酶RNA的结合情况。【结果】:通过基因序列合成, 结合PCR扩增方法获得了酵母端粒酶RNA基因, 并将其构建到体外转录载体上; 体外转录获得大量的酵母端粒酶RNA(Yeast-RNA-239); 使用SuperDeX-200/16/60成功分离得到了纯净的Yeast-RNA-239。NaCl、MgCl2浓度对酵母端粒酶RNA构型有一定的影响, 表现为没有NaCl或MgCl2时, RNA的构型均一且致密; 随NaCl、MgCl2浓度的增大, RNA构型逐渐变得松散; 而四膜虫端粒酶相关蛋白p65能与酵母端粒酶RNA有效结合。【结论】:在体外成功制备了高纯度的酵母端粒酶RNA, NaCl、MgCl2浓度对其构型有影响, 四膜虫端粒酶相关蛋白p65能够帮助端粒酶RNA正确折叠。