奶牛隐孢子虫Nested PCR-RFLP方法的建立及初步应用

编号 zgly0001371134

文献类型 期刊论文

文献题名 奶牛隐孢子虫Nested PCR-RFLP方法的建立及初步应用

作者 王权  陈永军  袁耀明  李安平  蒋蔚  朱志宏  安立刚 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  上海光明荷斯坦牧业有限公司 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2009年03期

年份 2009 

分类号 S858.232.723 

关键词 奶牛  隐孢子虫  巢式PCR-RFLP 

文摘内容 为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT14I,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.p)和安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni,C.an)卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800bp和500bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊/g粪便;对于由内引物扩增出的500bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT14I酶切,酶切后的片段分别为416bp和92bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切。用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19.02%和3.5%,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是C.p和C.an,进口奶牛感染的主要是C.p。研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的Nested PCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种。