犬瘟热病毒H基因原核表达载体的构建

编号 zgly0000597896

文献类型 期刊论文

文献题名 犬瘟热病毒H基因原核表达载体的构建

作者 王亚君  华育平 

作者单位 东北林业大学野生动物资源学院 

母体文献 现代生物医学进展 

年卷期 2008,8(10)

页码 1849-1851

年份 2008 

分类号 Q78  Q813 

关键词 犬瘟热病毒  H基因  表达载体  构建 

文摘内容 利用本实验以前构建的含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-T质粒，根据pMD18-T-H序列设计带有XbalI和HindⅢ酶切位点的引物，对H基因进行PCR扩增，得到约1800bp左右的片段。该片段被克隆到pMD18-Tsimple载体上，用XbalI和HindⅢ进行单、双酶切鉴定．筛选阳性克隆。将阳性克隆再用XbalI和HindⅢ进行双酶切，纯化回收CDVH基因片段。将原核表达载体pPROEXTMHTa、pet-30b用同样的方法酶切，回收载体片段。将CDVH基因片段分别用T4连接酶连接到回收的pPROEXTMHTa、pet-30b载体上，构建原核表达载体质粒pPROEXTMHTa-H和pet-30b-H。再用XbalI和HindⅢ进行单、双酶切鉴定阳性载体。本实验为下一步H蛋白表达、纯化并作为CDV诊断用抗原及CD的免疫预防奠定了基础。